John Belushi (VF : Jacques Dynam) : « Joliet » Jake Blues
Dan Aykroyd (VF : Patrick Préjean) : Elwood Blues
James Brown (VF : Sady Rebbot) : le révérend Cleophus James
Cab Calloway (VF : Georges Aminel) : Curtis
Ray Charles (VF : Robert Liensol) : Ray
Aretha Franklin (VF : Marie-Christine Darah) : Mme Murphy, la femme de Matt et propriétaire du « Soul Food Café »
Steve Cropper (VF : Julien Thomast) « le Colonel » (guitare)
Donald Dunn (VF : Mario Santini) « le Canard » (basse)
Murphy Dunne (VF : Marc François) « Murph » (piano)
Willie Hall (en) (VF : Greg Germain) « l'Armoire à glace » (batterie)
Tom Malone « la Girafe » (trombone + saxophone ténor)
Lou Marini (en) (VF : Julien Thomast) « Blue Lou » (saxophone alto)
Matt Murphy « Guitar » (guitare rythmique)
Alan Rubin (VF : Claude Nicot) « Mr Fabulous » (trompette)
Les frères Blues sont deux délinquants stoïques, imperturbables, flegmatiques et drôles, reconnaissables à leur look caractéristique composé d'un chapeau, costume, lunettes noires et chaussettes blanches. Ils se retrouvent lorsque « Joliet » Jake (incarcéré pour vol à main armée) est libéré de la prison de Joliet dans l'État d'Illinois sous la responsabilité de son frère Elwood. Ils apprennent que l'orphelinat catholique où ils ont été élevés est surendetté et va être rasé, à moins de payer les arriérés de taxes foncières dans un très bref délai administratif de 11 jours, au bureau administratif des impôts de Chicago.
Les Blues Brothers partent en « mission pour le Seigneur » et décident de reconstituer leur ancien talentueux groupe de musique dispersé avec le temps pour repartir en tournée musicale à base de rhythm and blues noir américain, et de récolter honnêtement la somme de 5 000 $ nécessaire à la survie de l'orphelinat. Leur conduite insouciante dans leur vieille voiture de police Bluesmobile (Dodge Monaco 1974) attire rapidement l'attention de la police de l'Illinois.